禽腺病*(FAdV)属于禽腺病*属,包括5个种(FAdV-A~E)和12个血清型(FAdV-1~8a和8b~11)。这种无包膜病*直径约70-nm,含有约45kb的双链线性DNA基因组,编码8种结构多肽(如六角蛋白、五肽和纤维蛋白)。一般来说,与FAdV感染相关的显著临床症状包括包涵体肝炎、肌胃糜烂和心包积液综合征(HPS),大多数血清型都与包涵体肝炎有关。但近年来在亚洲和一些欧洲国家蔓延的肌胃糜烂主要是由FAdV-1引起的,而广泛传播的HPS完全由FAdV-4型引起,是由FAdV引起的最严重的疾病,特别是在肉鸡中,造成了巨大的经济损失。特别是,迄今为止的报告表明,FAdV可以在鸭和鹅之间传播,证实了新出现的FAdV感染对整个家禽业构成了潜在危险。
随着分子诊断技术的不断进步,环介导等温扩增、交叉引物扩增、荧光微球免疫分析和液滴数字PCR等新技术被成功地应用于FAdV的检测,并克服了传统方法存在的大部分缺点。在RPA反应中,利用噬菌体衍生的重组酶与单链寡核苷酸引物结合,高效扫描互补模板DNA序列。置换的模板与单链DNA结合蛋白相互作用,保持稳定的结构,然后当重组酶从寡核苷酸的30末端分离时,以DNA聚合酶的PCR方式延伸,为了简化FAdV的检测条件,建立了可用的RPA检测方法。
本研究成功地建立了一种适用于所有12个血清型(FAdV-1~8a和8b~11)的新型重组酶聚合酶扩增技术(RPA),用于FAdV的检测。在温度为26~42℃的恒温条件下,不超过14min即可完成整个扩增过程,明显优于终点聚合酶链反应(98min)的检测灵敏度(低至0.1fg病*DNA),避免了复杂的热循环仪,操作简单。此外,相同的引物不能与其他被测病*产生阳性反应,说明RPA方法的特异性是可以接受的。此外,该方法可以有效地检测不同禽源的FAdV株和流行株,是一种快速、可靠FAdV诊断工具,也是终点PCR的一种替代方法,具有较高的实用价值。
本文作者:周宁
责任编辑:孙亚妮
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